測(cè)定梅花點(diǎn)舌丹中華蟾酥毒基與脂蟾毒配基含量實(shí)驗(yàn)報(bào)告

　　1、儀器與試藥

　　日立L-2130高效液相色譜儀；日立L-2420紫外檢測(cè)器；大連依利特Echrom型色譜工作站；島津2401紫外分光光度計(jì)；超聲波清洗器SK252H型(上海產(chǎn))；分析天平(上海良平精密儀器有限公司,Max100 g,D=0.000 1 g)。 華蟾酥毒基(批號(hào)110803-200504)和脂蟾毒配基(批號(hào)110718-200507)對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所,供含量測(cè)定用。乙腈、甲醇(天津四友)為色譜純,其他試劑均為分析純。水為重蒸水。

　　2、溶液的配制

　　2.1 供試品溶液的配制

　　取重量差異項(xiàng)下的本品,研細(xì),約1.5 g,精密稱(chēng)定,置錐形瓶中,精密加入甲醇25 mL,稱(chēng)定重量,超聲處理(功率250 W,頻率59 kHz)30 min,放冷,再稱(chēng)定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),即得。

　　2.2 陰性樣品溶液的制備

　　取缺蟾酥陰性樣品,按“2.1”項(xiàng)下方法操作,即得。

　　2.3 對(duì)照品溶液的制備

　　取華蟾酥毒基對(duì)照品15.94 mg,精密稱(chēng)定,取脂蟾毒配基對(duì)照品18 mg,精密稱(chēng)定,分別置25 mL量瓶中,用甲醇溶解(必要時(shí)超聲)并稀釋至刻度,搖勻,分別精密量取各1 mL,分別置10 mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得對(duì)照品溶液(每1 mL含華蟾酥毒基63.75 μg、脂蟾毒配基72.00 μg)。

　　3、色譜條件

　　用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑：乙腈-水(43.5∶56.5)為流動(dòng)相；柱溫：室溫；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為296 nm；進(jìn)樣量：20 μL。理論板數(shù)按華蟾酥毒基、脂蟾毒配基峰計(jì)算不低于2 700。色譜圖見(jiàn)圖1。

　　4、方法學(xué)驗(yàn)證

　　4.1 線(xiàn)性關(guān)系

　　取華蟾酥毒基和脂蟾毒配基對(duì)照品,精密稱(chēng)定,用甲醇稀釋制成華蟾酥毒基為5.31、10.63、21.25、42.50、63.75 μg/mL和脂蟾毒配基為6.00、12.00、24.00、48.00、72.00 μg/mL的系列。取上述溶液20 μL,注入液相色譜儀,測(cè)定。結(jié)果華蟾酥毒基線(xiàn)性方程為Y=21.57X+10.15,相關(guān)系數(shù)r=0.999 8；脂蟾毒配基線(xiàn)性方程為Y=18.79X-10.56,相關(guān)系數(shù)r=0.999 7。結(jié)果表明,華蟾酥毒基、脂蟾毒配基對(duì)照品分別在5.31～63.75 μg/mL、6.00～72.00 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值呈現(xiàn)良好線(xiàn)性關(guān)系。

　　4.2 精密度試驗(yàn)

　　取同一供試品,分別按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。精密吸取20 μL,注入液相色譜儀,依法連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果華蟾酥毒基RSD=2.89%,脂蟾毒配基RSD=1.50%；表明精密度良好。取同一供試品溶液,在0、2、4、6、8、10、24 h不同時(shí)間內(nèi),分別精密吸取20 μL,注入液相色譜儀,進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果華蟾酥毒基RSD=2.89%,脂蟾毒配基RSD=2.40%；表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。精密稱(chēng)取本品約1.5 g,共6份,分別按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,于上述色譜條件下連續(xù)測(cè)定,分別計(jì)算華蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量(n=6),RSD分別為2.38%和2.96%。精密稱(chēng)取同一供試品,共6份,分別精密加入華蟾酥毒基、脂蟾毒配基對(duì)照品,分別按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,于上述色譜條件下連續(xù)測(cè)定,計(jì)算各樣品中華蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量,并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。表1 華蟾酥毒基、脂蟾毒配基回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （略）

　　4.3 樣品含量測(cè)定

　　取本品各批約1.5 g,精密稱(chēng)定,分別按“2.1”項(xiàng)下同法操作制備供試品溶液,于上述色譜條件下連續(xù)測(cè)定,計(jì)算各樣品中華蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量。本品為中藥復(fù)方制劑,組分復(fù)雜,經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),樣品的提取及前處理對(duì)華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量測(cè)定及各組分的分離影響較大,故對(duì)樣品的提取及前處理?xiàng)l件進(jìn)行了篩選。為確定用何種溶劑提取、溶劑的用量、超聲處理的時(shí)間,我們參考2005年版《中國(guó)藥典》(一部)梅花點(diǎn)舌丸、麝香保心丸及蟾酥藥材等項(xiàng)下的含量測(cè)定方法[1],采用正交設(shè)計(jì)方法安排實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,提取液用甲醇,溶液劑量25 mL,超聲處理30 min,可得到滿(mǎn)意的結(jié)果。

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